Норма антиспермальных антител у мужчин. Антиспермальные антитела у мужчин и женщин
В случае, если семейная пара длительное время не может зачать ребенка, проводится обследование супругов. Одним из методов выявления причин бесплодия у мужчины является спермограмма. В некоторых случаях выявляются антиспермальные антитела (АСАТ). О том, как влияют на зачатие АСАТ, методах выявления и лечения расскажем в статье.
Общая информация о проблеме
Антиспермальные антитела выступают против антигенов сперматозоидов. Говоря доступным языком, эти тела выступают как иммунологический фактор против сперматозоидов и вырабатываются в организме у мужчины и у женщины. Рассмотрим, как происходит появление проблемы в каждом случае.
Антиспермальные антитела у мужчины
У мужчин сперматозоиды не вырабатываются вплоть до начала полового созревания. Из-за этого иммунная не воспринимает тельца как свои и пытается вести борьбу с «инородными» телами. Если бы не наличие защиты у спермиев против клеток иммунной системы – мужчина был бы бесплоден от рождения.
Одним из механизмов защиты «живчиков» от своего же организма является барьер между семенными каналами и кровеносными сосудами. В норме кровь и сперматозоиды не соприкасаются, но при отклонении происходит попадание спермиев в кровь. В ответ на это организм запускает защитные механизмы и вырабатываются антиспермальные антитела.
Факторы, провоцирующие патологию:
- варикоцеле – заболевание, при котором расширяются вены, расположенные вокруг семенного канатика;
- перекрытие семявыводящих каналов опухолью или инородным телом;
- травмы с нарушением целостности внутренних кровеносных сосудов, расположенных рядом с мочеполовой системой;
- различного рода инфекции;
- крипторхизм – неопущение одного из яичка у новорожденного мальчика;
- хирургические вмешательства – при вазэктомии (перевязка семявыводящих протоков) одним из осложнений у 65% мужчин является появление антиспермальных антител.
Онкологические заболевания также становятся причиной возникновения этой проблемы.
В дальнейшем АСАТ связываются с антигенами, расположенными на головке сперматозоида и блокируют рецепторы, отвечающие за прикрепление спермия к яйцеклетке женщины. В итоге внешне при половом акте нет никаких отклонений, происходит эякуляция, но из-за заблокированных рецепторов оплодотворения не происходит.
Читайте также: Правила сдачи спермограммы
При другом варианте развития событий, антиспермальные антитела связываются с антигенами, расположенными на хвосте сперматозоида. Как результат – «головастик» теряет подвижность и не может достичь женской яйцеклетки.
Антиспермальные антитела у женщин
Несмотря на то, что наш сайт посвящен проблемам с мужским здоровьем, описываемая проблема неразрывно связанна с особенностями женского организма. Потому рассмотрим патологию с двух ракурсов.
В организме мужчины АСАТ может и не быть, но при возникновении ряда факторов они начинают вырабатываться в крови у женщин. Для организма прекрасной половины человечества сперматозоиды являются в прямом смысле инородными телами. Если нет патологий, то защитным барьером выступает слизистая оболочка влагалища, перекрывающая доступ сперматозоидов к кровеносной системе женщины.
При возникновении воспалительных заболеваний женских половых органов защитный барьер разрушается, сперматозоиды соприкасаются с кровью. В ответ организм начинает вырабатывать иммунные тела (АСАТ), изменяется функционирование слизистой оболочки влагалища. Вместо того, чтобы вырабатывать слизь, необходимую для продвижения сперматозоида к яйцеклетке, организм создает оружие против «головастиков». В итоге при соприкосновении со слизистой оболочкой женского полового органа сперматозоиды теряют подвижность и гибнут. Оплодотворения не происходит.
Методы обнаружения антиспермальных антител
АСАТ, в большинстве случаев, выявляются случайно при сдаче спермограммы. Но, если подойти к вопросу зачатия ребенка ответственно, то уже на этапе планирования беременности супружеской паре необходимо пройти пробу Шуварского.
Во время этого исследования, иначе называемого посткоитальным тестом, берется цервикальная слизь (из шейки матки) у женщины и эякулят у мужчины после шестидневного воздержания от секса у мужчины. Полученные пробы рассматривают под микроскопом на предмет уничтожения сперматозоидов антителами. Если результаты теста отрицательные, то исследование на антиспермальные антитела проводятся у супругов в обязательном порядке.
Различают три группы АСАТ:
- IgG антитела;
- IgМ антитела;
- IgA антитела.
В зависимости от того, к какому классу принадлежат обнаруженные АСАТ, проводится исследование эякулята, цервикальной слизи или крови.
MAR метод диагностики
Это тест на наличие антиспермальных антител основанный на смешивании капли спермы мужчины с каплей силиконовых частиц. Если при мар тесте микрочастицы приклеиваются к сперматозоиду, это говорит о наличии АСАТ. Другое название метода – латекс тест (из-за использования силиконовых микрочастиц при анализе).
Антиспермальные антитела, анализ на которые назначается, когда мужчина и женщина долго не могут зачать ребенка, обнаруживаются у 9-36% бесплодных пар по сравнению с 0,9-4% у пар, имеющих детей. Он необходим, когда специалисты не обнаруживают видимых патологий, и может достоверно показать причину бесплодия.
Антиспермальные антитела борются со сперматозоидами и не дают им проникнуть к яйцеклетке. Они бывают обнаружены в крови у женщины, мужской сперме или в вагинальных выделениях. Такой метод анализа основан на исследовании спермы у мужчины и крови у женщины.
Появление спермы может вызывать особую реакцию иммунной системы у представителей обоих полов. Поэтому такие антиспермальные антитела способны повреждать или полностью уничтожать сперму. Когда концентрация антител сильно повышена, это означает, что они реагируют на сперму, блокируют ее передвижение или просто устраняют агрессивные в их понимании клетки. При такой ситуации зачать ребенка практически невозможно.
Такой процесс в организме человека называют иммунологическим бесплодием. У мужского пола такой процесс борьбы в организме происходит, если его сперма вступает в контакт с иммунной системой. Этот вид патологии характерен при повреждении яичек, вследствие оперативного вмешательства в половую сферу, впоследствии лечения опухолей, инфицирования предстательной железы.
Женский организм вырабатывает антиспермальные антитела вследствие аллергической реакции на сперму своего партнера. Такой вид иммунной реакции еще довольно плохо изучен, поэтому дать полноценный ответ на вопрос, почему это происходит, специалисты не могут. Но зато они способны уменьшить такую защитную реакцию и сделать микрофлору женщины и мужчины более комфортной для нормальной деятельности сперматозоидов.
Анализ на антиспермальные антитела назначается в ситуациях, когда нет явной причины бесплодия и существенных отклонений при полной диагностике партнеров не было обнаружено. К тому же перед данным анализом как правило проводятся другие соответствующие тесты.
Как проходит процесс исследования
АСАТ, или антитела, действующие на сперму, являются особыми ферментами иммунной системы человека, которые обнаруживаются в организмах обоих полов. Такой вид отклонения мешает естественному движению сперматозоидов, снижает возможность оплодотворения, при зачатии может воздействовать на развитие эмбриона.
Для супружеской пары есть два способа обнаружения этих антител:
- Мужчина сдает сперму и кровь из вены, которая является подтверждением возможного диагноза.
- Женщина сдает кровь из вены и у нее берут слизь из цервикального канала.
Определение наличия в организме антител для тех пар, которые согласились пройти процедуру ЭКО, является обязательным, так как искусственное оплодотворение – совсем не дешевое удовольствие, а если есть вид иммунной угрозы в виде антител, то даже чужая сперма будет в опасности.
Как готовиться к обследованию
Процедура забора крови происходит обычным образом. Единственное, что следует соблюдать: сдают ее натощак и перед сбором данного биоматериала за сутки лучше не курить. Сперма собирается методом мастурбации. Для этого мужчина должен следить за гигиеной рук и пениса, а также перед процедурой сбора биоматериала ему необходимо опорожниться в уборной. В процессе сбора спермы нельзя пользоваться лубрикантами или презервативами.
Если мужчина захочет пройти процесс сбора биоматериала в домашних условиях, то емкость со спермой должна быть доставлена в больницу в течение получаса. Контейнер со спермой нельзя хранить в холодильнике или подвергать нагреванию, нужно также избегать его попадания под прямые солнечные лучи. Сперма должна иметь температуру такую же, как тело человека.
Женщина проходит обычный сбор крови из вены. Анализ сбора биоматериала из цервикального канала происходит на гинекологическом кресле и не является болезненной процедурой.
Методы обследования
Есть несколько разновидностей анализа на антиспермальные тела. Выбор того или иного способа исследования зависит от самочувствия пациента и его показаний. Тест на наличие антител врачи стараются назначать в комплексе с общим анализом спермограммы. Но сначала специалисты рекомендуют такой вид анализа, как проба Шуварского.
Если этот тест ничего не выявил, то анализ АСАТ становится обязательным. Тест на наличие антител может иметь три вида: IgM, IgA, IgG. Это все виды иммуноглобулинов или белков, которые присутствуют в организме человека. Каждый из них определяет ту или иную степень бесплодия, если их обнаруживают в процессе исследования биоматериала.
Есть еще так называемый тест, или проба, Курцрока-Миллера. Он делается перед наступлением овуляции. Пара сдает такой тест вместе. У женщины берут из шейки матки биоматериал, а мужчина в этот день сдает сперму. Оба материала помещают в пробирку и наблюдают их взаимосвязь. Если сперматозоиды в такой среде значительно замедляются, то результат считают негативным, таким образом, антитела не обнаруживаются.
Способы обследования зависят от лабораторий и методов забора биоматериала:
- MAR-тест – вид анализа, основанный на исследовании спермы, смешанной со специальными латексными телами, покрытыми такой же структурой, как и в антителах, а также специальной сывороткой. Когда сперматозоиды и такого рода тела склеиваются, они имеют такую же структуру, что и антитела. Соответственно, это свидетельствует о присутствии тел в организме, которые провоцируют бесплодие.
- Латексная агглютинация – тест, похожий на предыдущий, только в качестве жидкости и микрофлоры для сперматозоидов используют цервикальную жидкость женщины.
- Иммуноферментный вид обследования крови на наличие антител.
К менее распространенным способам относят методы цитометрии проточного характера, радиоиммунный и другие. В основном эти виды диагностики основаны на установленных нормах присутствия антиспермальных тел в организме. У женщин и мужчин они разные, но самое важное, чтобы показатели их присутствия были минимальными. Однако даже их наличие еще не говорит об окончательном бесплодии, так как остается возможность снизить присутствие этих антител.
Есть ли риск при обследовании
При сдаче обычного анализа крови из вены, спермы или цервикальной жидкости единственный риск для пары – это неправильный сбор крови. На месте прокола вены могут появляться синяки, вены могут воспалиться.
Конечно, не исключены инфекционные заражения, но это уже совсем крайности и в эпоху современных лабораторий практически является фантастикой, так как стерильность и методы забора биоматериала сейчас во многих заведениях находятся на европейском уровне.
При сборе спермы, как и при взятии цервикальной жидкости, последствий и рисков нет.
Что влияет на результат
Сбор крови следует проводить натощак. За сутки до этой процедуры нельзя курить, пить алкоголь и лучше не принимать антибиотиков. Что касается сбора цервикальной жидкости, то здесь нет каких-либо ограничений. Собирая сперму для более точного анализа, мужчина не должен эякулировать последние два дня перед тестом, а лучше всего пять, так как этот процесс может отразиться на качестве анализа.
Следует понимать, что результаты анализа еще не означают окончательный диагноз – бесплодие.
Поэтому, даже если тесты показали наличие большого количества антиспермальных антител, не стоит отчаиваться. Поскольку современная медицина научилась выявлять наличие таких антител, она же умеет их подавлять. Конечно, стопроцентной гарантии врачи дать не могут, но шанс есть у всех. В крайнем случае для пар, у которых не получается естественное оплодотворение, всегда есть множество альтернативных вариантов и решений такой проблемы.
Так что, получив результаты анализов на руки, не стоит впадать в панику. Нужно предоставить все специалистам, которые помогут найти правильное решение. Они найдут подход к семейной проблеме, предложив существующие альтернативы. К тому же современная медицина не стоит на месте, и те проблемы, которые раньше считались неизлечимыми, сейчас вполне успешно устраняются.
Иммунная система в организме человека имеет огромное значение для репродуктивных функций. Она напрямую взаимодействует с процессом овуляции, зачатием и течением нормальной беременности. Нарушение работы иммунной системы может привести к сбою репродуктивного процесса и, следовательно, к трудностям к зачатию и вынашиванию плода, а также бесплодию.
Статистически было установлено, что более 20% супружеских пар страдают бесплодием вследствие нарушения иммунных процессов.
Один из наиболее серьезных иммунологических факторов – это образование антиспермальных антител. Впервые они были обнаружены в мужском организме в 1954 году. С той поры их влияние на репродуктивную функцию человека находится под пристальным наблюдением ученых всего мира. Что же такое антиспермальные антитела?
Это антитела, то есть вещества, представляющие собой белки иммунной системы человека, которые могут образовываться в мембране сперматозоидов, в сыворотке крови, в семенной плазме, а также в цервикальной слизи. Появляются они как в мужском, так и в женском организме.
Антиспермальные антитела бывают разного типа, но у всех них одна цель – травмирование или уничтожение сперматозоидов.
Методы диагностики
Если у супругов возникли трудности с зачатием, им обязательно нужно пройти обследование на предмет нахождения антиспермальных антител.
Первым делом, женщине и мужчине, нужно сдать поскоитальный тест – пробу Шуварского. При отрицательных показателях этого теста уже назначается комплексное обследование.
Вид и метод обследования будет зависеть от классификации антиспермальных антител – это могут быть lgG, lgM и lgA антитела.
Существует несколько методов исследования данного заболевания:
- Проба Курцрока–Миллера. Этот вид обследования назначается накануне , для этого берется слизь шейки матки и сперма. Подтверждением присутствия антител является малоподвижность сперматозоидов в слизи.
- Забор крови на антиспермальные антитела. Анализ проводится утром на голодный желудок, некоторое время перед исследованием не рекомендуется курить.
- MAR–тест. Этот способ показывает наличие антител в сперматозоидах мужчины. Для его проведения сперму смешивают с частицами латекса, на которые нанесены антитела и антисыворотка к этим антителам. Если сперматозоиды прилипают к этим частицам, значит в них есть анитспермальные антитела. Если же они двигаются свободно — эти антитела отсутствуют.
- Непрямой твердофазный иммуноферментный анализ. Для его проведения нужна сыворотка крови, в которой выявляется наличие антиспермальных антител. По ходу проведения исследования образцы соединяются с разными белками, если антитела присутствуют в сыворотке, эти частицы начинают с ними взаимодействовать.
У женщин и мужчин норма антиспермальных антител разная.
Антиспермальные антитела у мужчин
Антиспермальные антитела в мужском организме появляются во время образования спермы, то есть в период полового созревания. Их изначальное образование считается нормальным явлением.
Как это ни странно звучит, но сперматозоиды являются чужаками в мужском организме и должны тут же истребляться иммунной системой. Но суть в том, что сперматозоиды находятся в изолированном месте и проникают в кровь только в определенные моменты. К примеру, после хирургического вмешательства или в результате травмы.
Когда это происходит, организм начинает активно защищаться, а это значит, что антитела оказывают на подвижность сперматозоидов негативное влияние. Они становятся вялыми, теряют свою жизнеспособность, и уже не могут оплодотворить яйцеклетку. Это и есть фактор мужского бесплодия.
При диагностировании антител мужчине обязательно назначается спермограмма. Она нужна для определения антиспермальных антител в эякуляте.
Их наличие приводит к изменению качественного и количественного состава спермы, в частности:
- подвижности сперматозоидов;
- агглютинации;
- повышению уровня лейкоцитов;
- изменению семенной плазмы и др.
Все эти изменения зависят от количества сперматозоидов, которые попали под влияние антител. Наибольшее воздействие на подвижность оказывают антитела класса lgM. Вследствие этого воздействия может развиться тяжелая степень астенозооспермии.
В результате исследований обнаружено, что на деформацию сперматозоидов в большей степени влияют антитела класса IgA, особенно если их уровень слишком высок. Классы IgG и IgM делают семенную жидкость более вязкой и поднимают уровень лейкоцитов, помимо этого, антиспермальные антитела в сперме уничтожают сперматозоиды еще на уровне придатка яичка.
В случаях, когда показатели антител слишком высокие, супружеским парам для зачатия ребенка предлагаются дополнительные способы достижения беременности:
- микроскопический анализ сперматозоидов для плазматического введения в яйцеклетку;
- оплодотворение путем выбора лучшего сперматозоида;
- экстракорпоральное оплодотворение.
Эти способы эффективны и приносят хорошие результаты.
Антиспермальные антитела у женщин
Женская репродуктивная система содержит наибольшее количество иммунных клеток, чем выгодно отличается от мужской системы. По этой причине сперматозоиды, попадая внутрь женских половых путей, являются источником отрицательной реакции иммунной системы.
Что конкретно происходит в этот период с иммунной системой, к сожалению, еще не полностью изучено наукой, но это является причиной бесплодия.
У женщин, наряду с мужчинами, в организме есть механизм, который противится выработке антиспермальных антител. К примеру, во время овуляции у женщины включатся так называемый естественный отбор.
Среди попавших внутрь сперматозоидов выживут сильнейшие, остальные погибнут. Это нарушает некоторые процессы иммунной системы.
В результате может быть нарушена и фертильность. Это, в свою очередь, провоцирует появление антиспермальных антител.
Причиной повышенной нормы антител может служить воспалительный процесс. Во время заболевания иммунитет включает все защитные реакции и сперматозоидам становится очень трудно оплодотворить яйцеклетку.
Чтобы выявить, насколько повышен уровень антиспермальных антител у женщин, обследовать нужно слизь из цервикального канала. Это лучший вариант, потому что именно в шейке матки самый сильный иммунитет, который не дает сперматозоидам проникать дальше.
Однако, проводя обследование, нужно принимать во внимание тот факт, что если у женщины интенсивная половая жизнь, результат может быть неточен.
Их присутствие диагностируется в организме бесплодных мужчин или женщин в 10-35% случаев. Могут наблюдаться они и у полностью здоровых людей. Обследование пары с диагнозом бесплодие обязательно должно включать анализ на АСАТ. Особенно важно это исследование для мужчин, поскольку антиспермальные антитела в эякуляте – это свидетельство иммунного бесплодия.
Антиспермальные антитела представляют собой белки, которые вырабатывает иммунная система человеческого организма. Не важно, возникают они в мужском организме или женском, их задание одно – уничтожение сперматозоидов. Их присутствие в мужском организме вызывает аутоиммунное бесплодие, а у женщин в таком случае диагностируется иммунологическая несовместимость партнеров. Эти диагнозы выделены ВОЗ в отдельное заболевание.
Антиспермальные антитела у женщин
Антитела в человеческом организме являют собой биологически активные компоненты крови, появляющиеся тогда, когда в кровоток попадают чужеродные вещества. Поэтому в случаях, когда чужеродные для женского организма составляющие спермы по какой-то причине через слизистую оболочку контактируют с кровью, начинают формироваться антиспермальные антитела. Форум на эту тему можно найти, введя запрос в поисковой строке.
Их образование происходит при некоторых стечениях обстоятельств. АСАТ, причины появлений которых кроются в воспалениях органов женской мочеполовой системы, имеют достаточно сложный механизм. Сперматозоиды, двигаясь в половых путях, сталкиваются с очагом воспаления, где при помощи иммунокомпетентных клеток происходит активный процесс уничтожения чужеродных инфекционных объектов. Так под удар защитных клеток попадают и сперматозоиды.
Причины образования АСАТ у женщин:
- повреждения слизистой оболочки;
- высокий уровень лейкоцитов в сперме;
- сперматозоиды, взаимодействующие с антителами;
- высокое содержание аномальных сперматозоидов («старых»);
- проникновение сперматозоидов в ЖКТ (в результате анального или орального секса);
- просачивание спермы в брюшину. Может быть вызвано некорректно проведенной искусственной инсеминацией;
- прошлые попытки экстракорпорального оплодотворения (травма во время взятия ооцитов, сильный гормональный всплеск);
- коагуляция эрозии в шейке матки.
Компоненты уничтоженных сперматозоидов поглощают специальные клетки макрофаги, которые затем разбирают их на более мелкие элементы. Отдельные части разобранных сперматозоидов в дальнейшем будут образовывать на поверхности макрофагов антиспермальные антигены. После попадания макрофага в кровоток, а затем и в лимфоузлы, там начинают формироваться антиспермальные антитела, ранее не свойственные организму. Они распространяются по крови, проникают в слизистые оболочки в поисках вражеских антигенов - сперматозоидов, которых сразу же атакуют. Получается, что после того, как появились антиспермальные антитела у женщин, слизистая оболочка их половых органов, которая должна способствовать продвижению сперматозоидов к яйцеклетке, наоборот, становится труднопроходимым барьером на их пути.
Если же АСАТ повышены, но, несмотря на это, беременность наступила, существует риск их отрицательного воздействия на жизнеспособность плода.
Здоровая слизистая не допустит, чтобы сперматозоиды контактировали с клетками крови, избегая тем самым описанного патологического процесса. Антитела будут вырабатываться, независимо от того, каким способом антигены попали в кровоток. То есть, явление может инициироваться и при проглатывании эякулята во время орального секса, и при неудачных попытках ЭКО.
Антитела к сперматозоидам у мужчин
Как не странно, сперматозоиды могут считаться чужими и в мужском организме. АСАТ у мужчин формируются в период полового созревания, то есть, тогда, когда в организме начинает вырабатываться сперма. Антигены семени, появляющиеся у мальчиков в подростковом возрасте, считаются «новичками» в организме. А потому, соответственно, должны уничтожаться иммунной системой. И так было бы, но природа все продумала до мелочей. Сперматозоиды изолированы, и в кровь могут попасть лишь в чрезвычайных ситуациях, после которых биологический барьер между семенными путями и кровеносными сосудами нарушается.
Причин для такого проникновения спермы в кровеносную систему несколько:
- Закупорка путей, которые выводят семя;
- Сильные травмы малого таза;
- Инфекционные заболевания;
- Крипторхизм и онкологические недуги;
- Операции на брюшной полости или половых органах.
Попавшие в кровь сперматозоиды воспринимаются как чужеродные клетки, после чего включается механизм защиты.
АСАТ в сперме и сыворотке крови негативно сказываются на образовании, подвижности, жизнеспособности и транспортировке сперматозоидов, а соответственно, и на возможности оплодотворить яйцеклетку.
Обследование на наличие антиспермальных антител
Существует далеко не один анализ на антиспермальные тела. Выбор метода исследований зависит от показаний пациента. Согласно рекомендации ВОЗ тест на АСАТ в эякуляте необходимо проводить при каждом анализе спермограммы. Но перед тем пара должна также пройти поскоитальный тест (пробу Шуварского). Если его результат отрицательный, определение антиспермальных антител у женщины и мужчины будет носить обязательный характер. В зависимости от того, какого именно класса АСАТ (IgG, IgМ или IgA) присутствуют в организме, будет проводиться исследование крови, эякулята или цервикальных выделений.
Может проводиться также тест на антитела инвитро (проба Курцрока-Миллера). В таком случае паре необходимо приехать на исследование накануне овуляции и сдать для анализа слизь шейки матки и сперму. Материалы помещаются в пробирку, после чего оценивается их взаимодействие вне организма женщины. Результат теста считается негативным, если сперматозоиды становятся в слизи менее подвижными.
Показания к сдаче анализов:
- агглютинация, а также агрегация сперматозоидов;
- низкая активность сперматозоидов;
- нежизнеспособность сперматозоидов;
- незначительное количество спермы в цервикальной слизи;
- неудачные попытки ЭКО.
Также показанием является идиопатическое бесплодие.
Относительно анализа, как сдавать его, зависит от метода исследования. Забор крови делается натощак, за час до этого не рекомендовано курить. Обследование на антиспермальные антитела, цена которого зависит от выбранной лаборатории и метода, проводится следующими способами:
- MAR-тест на антиспермальные антитела, результаты которого указывают на присутствие АСАТ на мембранах сперматозоидов. При этом исследовании сперма смешивается с латексными частичками, которые покрыты антителами, и антисывороткой к антителам. Если сперматозоиды склеиваются с этими частичками, это значит, что на их поверхности есть антиспермальные антитела. Если же свободно перемещаются – АСАТ отсутствуют;
- метод латексной агглютинации. Схожий с предыдущим методом. Но используется для определения антиспермальных антител в цервикальной жидкости и выявления малоподвижных сперматозоидов. Латексные частицы соединяют с подготовленными образцами жидкостей. Результаты анализа делаются на основе отсутствия или наличия склеивания (агглютинации) сперматозоидов;
- твердофазный непрямой иммуноферментный анализ крови на антиспермальные тела.
Среди менее распространенных методов диагностики – проточная цитометрия, иммунофлуоресценция, радиоимунный метод и прочие, помогающие определить в каком количестве присутствуют в организме АСАТ. Норма у мужчин и женщин разная, но лучше, если показатель АСАТ низкий. В здоровом организме они не выявляются. Антитела к антигенам спермы могут быть повышенными лишь при некоторых патологиях репродуктивной системы. Хотя их присутствие еще не значит, что пара бесплодна, но они способны в два раза снизить вероятность зачатия. Нельзя также исключать бесплодие, если даже отсутствуют антиспермальные антитела.
Анализы на антиспермальные и антифосфолипидные антитела являются обязательными перед процедурой экстракорпорального оплодотворения.
Антиспермальные антитела: как лечить?
Лечение данной патологии у женщин и мужчин проводится лишь в случае необходимости зачать и выносить ребенка и зависит оно от результатов исследований. На сегодня подавить АСАТ в женском организме полностью практически невозможно. Существует несколько способов, как их снизить:
- у женщин концентрацию АСАТ может уменьшить продолжительное использование барьерной контрацепции (до полугода), которое исключается лишь в благоприятные для зачатия дни;
- у мужчин, прежде всего, необходимо провести дополнительные исследования, чтобы выяснить причину, по которой появились антиспермальные антитела. Лечение заболевания, повлекшего образование АСАТ, решит проблему.
Кроме всего прочего, обоим супругам может назначаться медикаментозное лечение, цель которого – понижение производства антиспермальных антител.
Если же лечение АСАТ не приносит результатов, необходимых для беременности, на помощь приходят вспомогательные репродуктивные технологии – внутриматочная инсеминация и экстракорпоральное оплодотворение. Однако, если у супруга устанавливается наличие антиспермальных антител у головки сперматозоидов, то искусственная инсеминация неэффективна.
Самые важные и интересные новости о лечении бесплодия и ЭКО теперь и в нашем Telegram-канале @probirka_forum Присоединяйтесь!
Не все знают, что такое иммунология репродукции, и чем она занимается. Между тем, именно в этой области в последние годы были сделаны очень важные открытия, позволившие по-новому взглянуть на целый ряд нарушений репродуктивной функции и разработать новые эффективные методы лечения.
Предметом изучения иммунологии репродукции являются:
- нарушения иммунитета при гинекологических и андрологических заболеваниях, в том числе при хронических воспалительных процессах (снижение иммунитета как следствие и причина хронического течения воспалительных процессов);
- нарушения тканевого взаимодействия на всех этапах беременности, начиная с зачатия (взаимодействие сперматозоидов и яйцеклетки) и заканчивая родами и лактацией (беременность - это уникальный феномен дружественного сосуществования двух иммунологически разных организмов - матери и плода);
- аутоиммунные нарушения, приводящие к сбою в процессе созревания сперматозоидов и яйцеклетки, оплодотворения и развития беременности на всех сроках (например, повышенный уровень антиспермальных антител, антител к фосфолипидам, компонентам щитовидной железы);
- особенности течения беременности и родов при аутоиммунных заболеваниях (ревматизм, системная красная волчанка, бронхиальная астма);
- резус-конфликтная беременность;
- влияние иммунного статуса матери на формирование функциональных систем плода (пример: влияние антител к фактору роста нервов в крови матери на вероятность развития осложнений во время беременности) предрасположенности к нейро-психическим заболеваниям у детей);
- вопросы иммунокоррегирующего лечения при вирусных заболеваниях в акушерстве, гинекологии и андрологии;
- вопросы специфической и неспецифической профилактики развития инфекционных заболеваний в процессе подготовки к беременности и родам.
И это далеко не все. Нет ни одного процесса в организме, в котором так или иначе не участвовали бы иммунные факторы.
Антиспермальные антитела. Методы диагностики
Антиспермальные антитела - это антитела к антигенам мембраны сперматозоидов
Методы определения антиспермальных антител
Впервые антиспермальные антитела в сыворотке бесплодных мужчин описали Rumke и Wilson в 1954 г.
Антиспермальные антитела обнаруживаются: в сыворотке крови, цервикальной слизи, семенной плазме, на поверхности сперматозоидов.
Чаще всего это антитела класса G, реже IgA и IgM.
Антиспермальные антитела обнаруживаются у здоровых мужчин (1-10%), у мужчин с бесплодием (15-22%), при этом в высоком титре всего у 6-7% и у бесплодных женщин.
Антиспермальные антитела у мужчин
Антиспермальные антитела в процессе сперматогенеза появляются на стадии сперматоцитов первого порядка, причем уровень их экспрессии увеличивается по мере развития сперматозоидов, они обладают свойством аутоантигенности, т.е. иммунологически чужеродны в собственном организме. У здоровых мужчин сперматозоиды, находящиеся в придатке яичка (эпидидимисе), подвергаются фагоцитозу, если не наступает эякуляция. Однако это не связано с появлением антиспермальных антител, что, возможно, обусловлено:
- иммунологической толерантностью, вызванной резорбцией сперматозоидов;
- блокадой образования антиспермальных антител другими антителами;
- индивидуальными особенностями антителообразования.
Образованию антиспермальных антител в разных отделах мужской репродуктивной системы препятствуют различные механизмы. Так, в яичке защиту сперматозоидов и клеток сперматогенеза осуществляет гематотестикулярный барьер (ГТБ), который изолирует клетки сперматогенеза от иммунокомпетентных клеток организма. Основу этого барьера составляют клетки Сертоли и их отростки. После выхода сперматозоида из яичка действует другой механизм защиты: способность сперматозоидов мимикрировать (приспосабливаться) к окружающей среде, т. е. сбрасывать с оболочки ранее сорбированные антигены и адсорбировать новые - из других сред, в том числе и из женского репродуктивного тракта. Эта способность сильнее выражена у жизнеспособных спермиев. Кроме того, в спермоплазме содержатся местные регуляторные факторы, препятствующие образованию антиспермальных антител и развитию клеточной антиспермальной сенсибилизации (например, иммуносупрессивный фактор спермоплазмы). Эти факторы секретируются в придаточных железах мужской репродуктивной системы.
Сбой механизмов защиты на любом уровне приводит к появлению антиспермальных антител
. Так, повреждение ГТБ открывает для иммунной системы доступ к ткани яичка, являющейся носителем антигенов, к которым в организме не выработана иммунологическая толерантность. Чаще всего гематотестикулярный барьер повреждается в области сплетения и семявыносящих канальцев. Лимфоциты вызывают первичное повреждение, способствующее проникновению цитотоксических антител и комплемента. Деструкция в системе семявыносящих протоков ведет к вторичным иммунным поражениям в пределах семенных канальцев, вовлекающим клеточно-специфические антигены на всех стадиях сперматогенеза и появление антиспермальных антител. Это экспериментальная модель, которая имеет свои аналоги в клинике. Например, хирургические вмешательства, травмы мошонки, воспалительные заболевания мужской репродуктивной системы различной этиологии часто приводят к нарушению целостности ГТБ и развитию аутоиммунитета к антигенам сперматозоидов
Недостаточность механизма мимикрии приводит к контакту спермальных антигенов с иммунной системой и выработке антиспермальных антител как в мужском, так и женском организме. Нарушения процессов сперматогенеза (в яичке) или функционального созревания спермиев (в эпидидимисе), вызванные различными причинами (воспалительные заболевания, варикоцеле, крипторхизм, эндокринная патология) приводят к снижению жизнеспособности сперматозоидов и нарушению механизма мимикрии.
Антиспермальные антитела у женщин
Половые органы женщины содержат большое количество иммунокомпетентных клеток. Естественное попадание спермы в половые пути женщины может вызвать иммунный ответ. Однако иммунологические процессы, происходящие в женском организме после попадания спермы, недостаточно изучены. Образованию антител в женском организме препятствуют различные механизмы, снижающие иммунный ответ. В период овуляции изменяется баланс Т-лимфоцитов: уровень Т-хелперов снижается, а Т-супрессоров повышается, а так же уменьшается концентрация иммуноглобулинов и С3 компонента системы комплемента. Важную роль в снижении иммунного ответа на сперматозоиды играют мужские механизмы защиты: мимикрия - сорбция и десоробция поверхностных антигенов при смене сред и иммуносупрессивный фактор спермоплазмы . Кроме того, предполагается, что в маточные трубы попадает только небольшое число генетически отобранных сперматозоидов, иммунологически отличающихся от большинства, остальные же погибают, блокируя местный иммунитет.
Нарушение фертильности сопровождается нарушением защитных механизмов и появлением антиспермальных антител. Выработку антиспермальных антител в женском организме стимулирует дополнительное воздействие других изоантигенов, получающих доступ в половые пути женщины, так иммунный ответ на антигены сперматозоидов может повышаться при воспалительных заболеваниях влагалища. Изоиммунный ответ на сперматозоиды может реализовываться через антитела или клеточно-опосредованные механизмы, каждый из которых оказывает чаще всего местный эффект.
Шейка матки является наиболее благоприятным и важным местом проявления местного иммунитета. Часто антиспермальные антитела обнаруживаются только в цервикальной жидкости и не определяются в сыворотке крови. Однако необходимо помнить, что гиперчувствительность замедленного типа к сперме и спермиммобилизирующие антитела могут встречаться и у здоровых женщин, имеющих регулярные половые сношения.
Возможные механизмы повреждающего действия антиспермальных антител на процессы фертильности
В литературе нет однозначного мнения о влиянии антиспермальных антител на качество эякулята. По мнению одних авторов - наличие антиспермальных антител не влияет на подвижность и другие морфологические характеристики качества спермы, другие считают, что антиспермальные антитела вызывают снижение скорости движения и жизнеспособности спермиев. Предполагается, что антиспермальные антитела могут нарушать функциональную целостность мембраны сперматозоидов. У мужчин с антиспермальными антителами часто наблюдается снижение показателей теста гипоосмотического набухания сперматозоидов, который сочетается со снижением оплодотворяющей способности эякулята. Сниженный тест гипоосмотического набухания сперматозоидов выявляется как у мужчин с нормальными, так и субнормальными показателями спермограммы. Антиспермальные антитела могут оказывать повреждающее действие на функцию предстательной железы, в частности на простасомы, органеллы, секретируемые ацинарными клетками предстательной железы. Антиспермальные антитела классов IgG и IgА цервикальной слизи и других жидкостей женского репродуктивного тракта препятствуют продвижению сперматозоидов и их пенетрации через цервикальную слизь, блокируют рецепторные участки на головке сперматозоида, ответственные за связывание с блестящей оболочкой яйцеклетки
Кроме того, антиспермальные антитела нарушают процесс капацитации сперматозоидов, воздействуют на акросомальную реакцию, блокируя экзоцитоз кортикальных гранул.
Методы определения антиспермальных антител:
Отрицательный посткоитальный тест дает обоснованные указания на наличие антиспермальных антител либо в сперме, либо в цервикальной слизи.
Для супружеских пар с отрицательным посткоитальным тестом исследование антиспермальных антител является обязательным.
Смешанный антиглобулиновый тест (MAR-test)
В настоящее время существует множество методик для определения антиспермальных антител. Наиболее простым и информативным является смешанный антиглобулиновый тест (MAR-test) , рекомендованный ВОЗ для рутинного скрининга образцов семенной жидкости.
Его преимуществами являются простота определения, возможность выявления антиспермальных антител на подвижных сперматозоидах.
Тест выполняется на предметном стекле, на которое наносят одну каплю свежей спермы, одну каплю латексных частичек, покрытых IgА, затем одну каплю антисыворотки к человеческому IgG, перемешивают, смесь накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом с увеличением 400х или 600х.
Если сперматозоиды не покрыты антителами, то они свободно плавают между частицами, если же сперматозоиды покрыты антителами, то они, перемещаясь, притягивают к себе частицы латекса и склеиваются с ними. Высчитывают % сперматозоидов, склеенных с латексными частицами, покрытыми IgG (это вполне исчерпывающее исследование, т. к. установлено, что IgА практически всегда появляются вместе с IgG).
Определение антиспермальных антител методом латексной агглютинации
Альтернативой этому тесту может служить определение антиспермальных антител методом латексной агглютинации . Этот тест не применим для выявления количества подвижных сперматозоидов, покрытых антиспермальными антителами, зато он информативен при низких показателях подвижности сперматозоидов, а также для выявления антиспермальных антител в цервикальной слизи.
Образцы для этого теста можно замораживать. Семенную жидкость или цервикальную слизь разводят буфером, центрифугируют, из надосадочной жидкости готовят разведения 1:100, 1:200 и т.д. На специальный планшет добавляют соответственные разведения образца и латексные частицы, затем оценивают появление агглютинации.
Если она появляется в разведении 1:100, тест считается положительным.
Определение антиспермальных антител в сыворотке крови
Для определения антиспермальных антител в сыворотке крови используются наборы на основе метода непрямого твердофазного иммуноферментного анализа.
Образцы разводят и помещают в микропланшет, ячейки которого покрыты смесью белков, способных взаимодействовать с антителами, антиспермальные антитела, находящиеся в образце связываются с этими белками и после определенной последовательности действий измеряется оптическая плотность содержимого ячеек, которая пропорциональна концентрации антиспермальных антител.
Нормальные значения: 0-60 Ед/мл; Промежуточные значения: 61-100 Ед/мл; Повышенные: более 100 Ед/мл.
Существуют и другие, менее распространенные методы определения антиспермальных антител: проточная цитометрия (определение антиспермальных антител и их концентрации на мембране сперматозоидов), радиоиммунный, иммунофлуоресценция и др.
Иммунное бесплодие
Бесплодие, невынашивание, привычный выкидыш - эти печальные проблемы не всегда связаны с организмом женщины.
По статистике, 10 — 15 процентов всех беременностей оканчивается выкидышем. Вы можете о нем не знать — крошечный эмбрион погибает еще до наступления месячных. Та же картина с искусственным оплодотворением (ЭКО): заместительной гормонотерапией организм матери подготовился идеально, только расти, малыш! Однако показатели успешно развивающейся беременности по-прежнему топчутся на 10 — 15 процентах. В чем же дело?
Невынашивание, как и бесплодие, — не какая-то отдельная болезнь. Это следствие неполадок и в репродуктивной системе, и вообще в организме будущих матери и отца. Это симптом: нормальное развитие плода под угрозой, а потому жизнь его невозможна. Причин тут несколько.
Беременность — уникальное явление: девять месяцев сосуществуют два абсолютно разных организма — матери и плода. Ведь лишь наполовину ребенок наследует материнские клетки — остальные белки и гены отцовские, чужие. Взаимодействие двух организмов обеспечивают белки тканевой совместимости — это как бы маркеры на клетках, с помощью которых иммунная система женщины распознает своих и чужих.
Вне беременности иммунные клетки, циркулирующие в организме как разведчики, выслеживают на поверхности всех без исключения клеток белковый код — белки тканевой совместимости. И если обнаруживаются клетки с измененной структурой (это занесенные микробы или измененные клетки самого организма), организм немедленно выдает иммунный ответ — атипические клетки уничтожаются. Кстати, это ключевой момент в развитии онкозаболеваний, и вопросы повышения иммунитета у врачей-онкологов едва ли не на первом месте.
При беременности, если бы процесс был таким однозначным, плод неизбежно погибал бы — внутри "чужие" клетки! Но во время беременности плод и его клеточные структуры неразличимы для иммунной системы материнского организма. Иначе — существует биобарьер на пути клеток-бойцов за иммунологическое единообразие, и беременность развивается и оканчивается счастливо.
Однако современные исследования выявили — барьер этот мнимый: либо гуморальный иммунитет матери включается, и вырабатываются антитела на факторы плода, либо клеточный — клетки не довольны пришельцами, и иммунный ответ следует незамедлительно — отторжение (выкидыш).
Но все не так однозначно — так же, как функциям всех органов свойственны возбуждение и торможение, так и в иммунной системе может включаться и активное отторжение, и иммунологическая толерантность (совместимость). Она-то и позволяет сохранить трансплантат — именно так рассматривают будущего ребенка иммунологи. Эта дилемма иммунной системы определяет причины невынашивания, что выражается или в сбоях иммунной регуляции организма, или в нарушениях иммунологического взаимодействия между организмами матери и плода.
Лишь к концу 80-х годов ученые вплотную подошли к решению проблем невынашивания, и возникло новое направление на стыке акушерства, гинекологии и перинатологии — иммунология репродукции . И хотя теория накопила немало ценной информации, буквально рвущейся к практике, ввести в лечебный обиход новые знания пока сложно — тормозят дело буквальное отсутствие средств и организация обследования пациенток. По крайней мере, в нашей стране.
А между тем практическая помощь оказывается все успешнее. По всем группам иммунных нарушений. Например, аутоиммунные нарушения матери. При этом в организме женщины появляются антитела, похожие на антитела при таких заболеваниях, как ревматизм, заболевания почек и мышечной системы, аллергические реакции, системная красная волчанка. В организме возникают извращенные иммунные реакции, когда антитела (белки) направлены против собственных тканей. Провоцирует их активность плохая наследственность или тяжелые инфекции, и в таких случаях беременность под угрозой.
Однако специальный анализ крови может вовремя определить сбой, суть которого — нарушение кровообращения в мелких сосудах плаценты — оболочки зарождающейся жизни. Этот микротромбоз можно распознать и лечить на самых ранних сроках, и тогда беременность не прерывается и развивается по всем физиологическим законам до конца. Этот путь перспективен, что доказывает простое уравнение: чем выше уровень антител (по-научному они называются антифосфолипиды), тем вероятнее выкидыш — более 80 процентов. А при своевременном назначении специального лечения, направленного на снижение свертываемости крови, вероятность донашивания беременности составляет тоже 80 процентов!
Успех определяется воздействием не на причину, а следствие — разжижая кровь аспирином, мы восстанавливаем нормальное кровообращение между матерью и плодом. Кстати, раньше, лет десять назад аспирин применялся в неоправданно больших дозах, что нередко приводило к нарушениям питания мозга и нервной системы ребенка. Сегодня такие аномалии исключены — аспирин берется в дозах, в 10 — 15 раз меньших, чем стандартная норма. Для усиления аспиринового эффекта применяют гепарин — это естественное вещество редко вызывает аллергические реакции, не проходит через плаценту, так что какие-либо воздействия на плод невозможны, а эффект полезного аспирина удваивается.
Еще одна причина невынашивоемости — антитела, направленные на клеточные ядра . Опасность тут возрастает потому, что они легко проникают через плаценту и составляют угрозу для клеток плода. И такие нарушения можно диагностировать на ранних сроках и успешно лечить.
Гораздо сложнее бороться с аллоиммунными нарушениями — тут речь о взаимоотношениях матери и плода как части отцовского организма. Чтобы беременность успешно развивалась, она должна быть распознана и признана иммунной системой матери. Если же материнские клетки вяло, неохотно реагируют на вновь прибывших — это белки, унаследованные от отца, — реакция совместимости задерживается, и даже может пропустить сигнал отторжения — чужое! И снова несостоявшаяся беременность.
Самое печальное, что это стойкий механизм: выкидыши подряд в такой ситуации — частое явление. Но есть специальные тесты, позволяющие распознавать сходства и различия между организмом матери и плода. Если реакция на плод замедленная (это можно определить по уровню антител в крови), то специальным образом можно провести иммунизацию матери лимфоцитами отца.
Что такое HLA?
HLA - human leucocyte antigens - антигены тканевой совместимости. (cиноним: MHC - major histocompatibility complex - главный комплекс гистосовместимости). На поверхности практически всех клеток организма представлены молекулы (белки), которые носят название антигенов главного комплекса гистосовместимости (HLA - антигены). Название HLA - антигены было дано в связи с тем, что эти молекулы наиболее полно представлены именно на поверхности лейкоцитов (клетки крови). Каждый человек обладает индивидуальным набором HLA - антигенов.
Молекулы HLA выполняют роль своеобразных "антенн" на поверхности клеток, позволяющих организму распознавать собственные и чужие клетки (бактерии, вирусы, раковые клетки и т.д.) и при необходимости запускать иммунный ответ, обеспечивающий выработку специфических антител и удаление чужеродного агента из организма. Синтез белков HLA - системы определяется генами главного комплекса гистосовместимости, которые расположены на коротком плече 6-й хромосомы. Выделяют два основных класса генов главного комплекса гистосовместимости:
- I класс включает гены локусов А, В, С;
- II класс - D-область (сублокусы DR, DP, DQ).
HLA антигены I класса представлены на поверхности практически всех клеток организма, в то время, как белки тканевой совместимости II класса выражены преимущественно на клетках иммунной системы, макрофагах, эпителиальных клетках.
Антигены тканевой совместимости участвуют в распознавании чужеродной ткани и формировании иммунного ответа. HLA - фенотип обязательно учитывается при подборе донора для процедуры трансплантации. Благоприятный прогноз пересадки органа выше при наибольшем сходстве донора и реципиента по антигенам тканевой совместимости. Доказана взаимосвязь между HLA-антигенами и предрасположенностью к ряду заболеваний. Так, практически у 85% больных анкилозирующим спондилитом и синдромом Рейтера выявлен HLA В27 антиген. Более, чем у 95% больных инсулинозависимым сахарным диабетом определяются HLA DR3, DR4 антигены.
При наследовании антигенов тканевой совместимости ребенок получает по одному гену каждого локуса от обоих родителей, т.е. половина антигенов тканевой совместимости наследуется от матери и половина от отца. Таким образом, ребенок является наполовину чужеродным для организма матери. Эта "чужеродность" является нормальным физиологическим явлением, запускающим иммунологические реакции, направленные на сохранение беременности. Формируется клон иммунных клеток, вырабатывающий специальные "защитные" (блокирующие) антитела.
Несовместимость супругов по HLA-антигенам и отличие зародыша от материнского организма является важным моментом, необходимым для сохранения и вынашивания беременности. При нормальном развитии беременности "блокирующие" антитела к отцовским антигенам появляются с самых ранних сроков беременности. Причем, самыми ранними являются антитела к антигенам II класса гистосовместимости.
Сходство супругов по антигенам тканевой совместимости приводит к "похожести" зародыша на организм матери, что становится причиной недостаточной антигенной стимуляции иммунной системы женщины, и необходимые для сохранения беременности реакции не запускаются. Беременность воспринимается, как чужеродные клетки. В таком случае происходит самопроизвольное прерывание беременности.
Для определения антигенов тканевой совместимости у супругов проводится HLA-типирование
. Для проведения анализа берется кровь из вены,
и из полученного образца выделяют лейкоциты (клетки крови, на поверхности которых наиболее широко представлены антигены тканевой совместимости). HLA-фенотип определяется методом цепной полимеразной реакции.
Антиспермальные антитела. Лечение
Вопрос о роли антиспермальных антител (АсАт) в бесплодии и репродуктивных потерях обсуждается в литературе с начала 80-х годов . В физиологических условиях АсАт не формируются, прежде всего благодаря существованию супрессорных (подавляющих их активность) механизмов как в сперме, так и в репродуктивном тракте женщины.
К нарушению физиологической супрессии антигенов спермы могут приводить воспалительные заболевания женского полового тракта, как клинически проявляющиеся, так и с бессимптомным течением. Показано, что у женщин с сексуально-трансмиссивными болезнями (болезни передающиеся половым путем) частота выявления АсАт выше, чем у здоровых женщин. Антиспермальные антитела у женщин могут быть обнаружены во всех отделах репродуктивной системы от влагалища до фолликулярной жидкости и в крови. При этом отмечено, что наличие циркулирующих в крови АсАт не всегда связано с наличием антител в репродуктивном тракте.
Повреждающие эффекты их многообразны и могут быть разделены на две группы:
- Эффекты, непосредственно оказывающие влияние на процесс оплодотворения , заключаются в подавлении миграции сперматозоидов через цервикальный канал (этим и объясняется цервикальный фактор), нарушении поступательно-прогрессивного движения сперматозоидов и их гибели в репродуктивном тракте женщины, блокировании прикрепления и проникновения сперматозоида в яйцеклетку и др.
- Эффекты, оказывающие негативное влияние уже после оплодотворения яйцеклетки сперматозоидом : нарушение дробления и нормального развития эмбрионов (зародыша), прямое отрицательное действие на жизнеспособность развивающегося эмбриона.
Для нейтрализации АсАт применяются разные методы. Одним из них является внутривенное введение гаммаглобулина , которое в последние годы широко используется за рубежом для коррекции различных аутоиммунных состояний. Однако высокая стоимость этого метода ограничивает его использование у нас в стране.
Альтернативным и доступным способом лечения является иммуноцитотерапия аллогенными лейкоцитами
. В течение последних 20-ти лет иммуноцитотерапия успешно используется для профилактики и лечения привычных спонтанных абортов.
Качественное обследование может быть обеспечено в специализированных центрах, каковыми являются, в частности, центры планирования семьи и репродукции, которые есть в большинстве регионов России.
02.09.2008
к.м.н. Б. Каменецкий
врач акушер-гинеколог Российско-Финского Центра «АВА-ПЕТЕР»,
г.Санкт-Петербург.